El conteo automático de reticulocitos: una herramienta de uso diagnóstico, clínico e investigativo / Automated reticulocyte count: a tool for diagnostic, clinical and research use

Se revisan los antecedentes históricos del conteo de reticulocitos como determinación indispensable en el laboratorio de hematología para la evaluación de la actividad eritropoyética durante la clasificación, diagnóstico y monitoreo de la respuesta terapéutica en distintos trastornos y situaciones clínicas, principalmente en casos de anemias. Se describe el tránsito del tradicional método de conteo de reticulocitos manual al método automatizado y la integración de los parámetros reticulocitarios al hemograma automatizado actual; además, se analizan las desventajas del método de recuento manual y las ventajas del método automatizado, así como los principios de detección en que se basa el conteo electrónico de reticulocitos. Con relación a los parámetros reticulocitarios, se describe su medición, cálculo y unidades de medida; también se resalta la importancia de la fracción de reticulocitos inmaduros y del contenido de hemoglobina reticulocitaria como variables de mayor uso clínico e investigativo en la evaluación de la respuesta medular ante diversos trastornos clínicos y protocolos terapéuticos. Por último, se alude a la necesidad del conocimiento y empleo de las variables reticulocitarias en la práctica clínica de rutina por parte de los clínicos y especialistas en hematología.

The historical background of reticulocyte count is reviewed as an essential determination in the laboratory of hematology for the evaluation of erythropoietic activity during classification, diagnosis and monitoring of therapeutic response of different conditions and clinical situations are also reviewed, especially in anemia The transition from traditional manual reticulocyte counting method to automated method and integration of the reticulocyte parameters to current automated complete blood count are described. The disadvantages of manual method and the advantages of automated methods are cited, as well as detection principles in which electronic reticulocyte count is based. Regarding reticulocyte parameters, measurement, calculation and units are described. The importance of immature reticulocyte fraction and reticulocyte hemoglobin content as variables most clinical and research use in evaluating bone marrow response to various clinical disorders and therapeutic protocols are highlighted. Finally, the need for knowledge and use of reticulocyte variables in routine clinical practice by clinicians and hematologist is referred.

Contagem de reticulócitos por citometria de fluxo utilizando acridine orange: validação de um novo protocolo / Flow cytometry reticulocyte counting using acridine orange: validation of a new protocol

Introduction: Currently, the reticulocyte counting is a challenge for clinical laboratories in Brazil, mainly for the ordinary ones, which still use the manual method. This method has some limitations, since it consists of a laborious method, time consuming, with low accuracy. Objectives: This study has developed and evaluated the performance of a New Laboratory Protocol for flow cytometry (FC) reticulocytes counting using acridine orange (AO) as dye, aiming to standardize a more precise, easy, fast implementation, and low cost protocol. After standardization of the New Protocol (FC/AO), it was compared with the manual method. The results were analyzed according to the recommendations of the National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), now known as Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), to evaluate the interchangeability of methods in linear regression analysis and paired t test, besides other quality control tests. Conclusion: Based on these results concerning to the correlation between the methods and the tests related to quality control, we can admit that FC/AO for reticulocyte counting shows undeniable advantages when compared to the preexisting manual method...

Introdução: Atualmente, a contagem de reticulócitos representa um desafio para os laboratórios clínicos no Brasil, principalmente os de pequeno e médio porte, nos quais ainda se utiliza o método manual. Este método apresenta algumas limitações, classificando-se como tedioso, demorado e de baixa precisão. Objetivos: O presente estudo desenvolveu e avaliou o desempenho de um novo protocolo laboratorial para contagem de reticulócitos por citometria de fluxo (CF) utilizando acridine orange (AO) como corante, visando padronizar um protocolo preciso, de fácil e rápida execução e custo acessível. Após a padronização do novo protocolo desenvolvido (CF/AO), fez-se a comparação com o método manual. Os resultados foram analisados de acordo com recomendações do National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), atualmente Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), para avaliar a intercambialidade entre os métodos, por meio da análise de regressão linear e teste t pareado, além de outros testes de controle de qualidade. Conclusão: Diante dos resultados obtidos referentes à correlação entre os métodos e os testes voltados ao controle de qualidade, pode-se admitir que o CF/AO estabelecido para contagem de reticulócitos possui vantagens inegáveis quando comparado com o método manual...

Analysis of manual reticulocyte counts in the clinical laboratories of Ponta-Grossa and Campos Gerais, PR, Brazil

Reticulocyte counts are widely used in laboratories to evaluate bone marrow erythropoietic activity and have great diagnostic and prognostic importance in the treatment of anemias. Reticulocytes are supravitally stained with new methylene blue or brilliant cresyl blue, which highlight the characteristic aspect of the reticulum visible by light microscopy. Known criteria were observed for good manual reticulocyte counting with special attention being paid to the preparation of reticulocyte slides, to counting fields without overlapping cells, and to the number of evaluated cells. The aim of this study was to evaluate the inter-observer variation and also to analyze the statistical error of manual reticulocyte counting. The Intraclass correlation coefficient (ICC) according to Bartko was used to evaluate the level of agreement among 12 laboratory technicians who evaluated the same 25 blood smears. The results of statistical analyses showed that the amount of random error, defined as (1-r2), varied from 4 percent to 60 percent among the technicians. Although imprecision occurred, the overall profiles were quite similar, and intraclass correlation coefficients indicated that the results obtained have clinical significance.

A contagem do reticulócitos é usada extensamente na rotina laboratorial para avaliar a atividade eritropoiética da medula óssea, e é de grande importância no diagnóstico e no prognóstico na terapia de anemias hemolíticas. São coradas com o azul de metileno novo e o azul cresil brilhante, o que conferem o aspecto característico de retículo quando observado ao microscópioótico. Critérios conhecidos foram observados para um bom desempenho da contagem manual de reticulócitos, principalmente, atenção especial nas películas do sangue durante a montagem das lâminas; contagem nos campos que não contém sobreposição celular; e também no número de células avaliadas. O objetivo deste estudo foi avaliar a variação interobservadores, analisar o erro estatístico da contagem manual dos reticulócitos, e demonstrar as limitações deste método. A análise de correlação intraclasses segundo Bartko [Psychol Rep 19:3,1966; 34:418,1974] foi usada para avaliar a concordância entre 12 observadores em um total de 25 lâminas do sangue, com contagens variadas de reticulócitos. Os resultados das análises estatísticas indicam que o erro casual, calculado como (1-r2) variou de 4 a 60 por cento entre os observadores. Embora ocorra imprecisão entre os observadores, o perfil geral entre eles é similar, e o coeficiente de correlação intraclasse indicou que os resultados obtidos são clinicamente úteis.

Clinical Significance of Reticulocyte Maturation Parameters in the Differential Diagnosis of Macrocytic Anemias / 대한진단검사의학회지

BACKGROUND: Macrocytic anemias are commonly seen in clinical practice, and precise etiologic diagnosis is essential for proper management. We evaluated the clinical utility of reticulocyte maturation parameters in macrocytic anemias to discriminate among myelodysplastic syndrome (MDS), megaloblastic anemia (MA), and non-megaloblastic macrocytic anemia associated with chronic liver disease (MA-CLD). METHODS: Using an automated reticulocyte counter, we retrospectively analyzed and compared reticulocyte maturation parameters including immature reticulocyte fraction (IRF), mean reticulocyte volume (MRV), mean sphered cell volume (MSCV) of normal control (N=34), and patients diagnosed with MDS (N=31), MA (N=52), and MA-CLD (N=196). RESULTS: Macrocytic anemias from MA, MDS and MA-CLD showed higher values of reticulocyte maturation parameters including IRF, MRV and MSCV than normal control (P or = 0.39), MRV (> or = 129.5 fL), and MSCV (> or = 102.3 fL) makes the diagnosis of MA-CLD unlikely and underlying MDS should be considered.

Anemia ferropriva e beta-talassemia heterozigota: aspectos laboratoriais e diagnóstico diferencial / Iron deficiency anemia and beta-thalassemia minor: laboratorial aspects and differential diagnostic

As anemias microcíticas e hipocrômicas consistem nas anemias mais freqüentes em todo o mundo. Esta alta incidência deve-se, principalmente, a anemia ferropriva e a beta-talassemia heterozigota. Desta forma, em regiöes onde essas duas formas de anemia estäo presentes, o correto diagnóstico torna-se imprescindível. Várias regras foram propostas para a realizaçäo do diagnóstico diferencial, entretanto, nenhuma delas mostrou-se completamente confiável para um diagnóstico preciso. o conhecimento das características de cada uma dessas doenças certamente facilitará o diagnóstico diferencial. A análise dos resultados do hemograma, das dosagens bioquímicas e da eletroforese, em conjunto, é necessária para um diagnóstico diferencial definitivo

Análise comparativa das técnicas manual e automatizada (ADVIA tm 120) para contagem de reticulócitos / Comparative analysis of manual and automated (ADVIA tm 120) reticulocytes counting

Os reticulócitos são células de origem eritróide com resíduos de RNA, sendo esses evidenciados com a utilização de colorações supravitais. O número de reticulócitos no sangue periférico reflete a atividade eritropoética da medula óssea. Considerando a importância da implantação de uma contagem de reticulócitos mais rápida e precisa, este trabalho tem por objetivo avaliar a correlação entre as técnicas manual e automatizada (ADVIA TM 120, Bayer Diagnostics) para contagem de reticulócitos. O equipamento ADVIA TM 120 utiliza uma reação citoquímica para a diferenciação e contagem de reticulócitos. Foram utilizadas nesse estudo 64 amostras de sangue obtidas de diferentes pacientes. As contagens foram realizadas pelas técnicas manual e automatizada, sendo que elas variaram de 0,6 a 10 porcento. Ao analisar os resultados obtidos pelas duas técnicas, foi possível observar uma forte correlação (r=0,9778, p<0,001) entre ambas. A implantação da técnica automatizada tem contribuído com a rotina do Laboratório Central de Análises Clínicas - ISCMPA, fornecendo resultados mais precisos em um menor tempo. A contagem de reticulócitos realizada no ADVIA tm 120 apresentou excelente correlação com a contagem manual, sendo bem mais prática, rápida e precisa.

Evaluation of reticulocyte counting using the Pentra 120 Retic automated haematology analyzer: clinical appplication of mean fluorescence index (MFI) in bone marrow transplantation

Objetivo: avaliar o desempeho do analisador hematológico Pentra 120 Retic na rotina laboratorial e a utilidade do índice médio de fluorescência (MFI) como indicador da recuperaçäo medular após o transplante de medula óssea (TMO). Material e métodos: o Pentra 120 Retic analisa os reticulócitos por meio de citometria de fluxo, usando o Thiazole Orange como marcador do RNA. 1) protocolo de avaliaçäo do instrumento: NCCLS (1993); 2) MFI e TMO: contagem dos reticulócitos e as fraçöes de imaturidade foram monitorizadas em 15 pacientes submetidos à TMO. Resultado: 1) avaliaçäo do equipamento: teste de reprodutividade mostrou coeficiente de variaçäo (CV)=5,5 e 11, 6 por cento nas contagens de reticulócitos provenientes de amostras com valores normais de reticulócitos e CV = 4,47 e 11,6 por cento nas reticulocitoses. Nas amostras com reticulócitos < 0,5 por cento, o CV foi maior (CV=18,5 e 22,4 por cento), mas sem compromentimento clínico. Entre as fraçöes de maturidade, o MFI mostrou ser o mais preciso, com CV = 6,9 e 11,9 por cento nas amostras normais, CV = 3 e 3,55 por cento nas reticulocitoses e CV= 28,3 e 38,5 por cento nas reticulocitopenias. Testes de linearidade e carry-over resultaram, respectivamente, em r=0,99 e < 5 por cento de contaminaçäo. Comparaçäo com Cell Dyn 3500 revelou concordância entre os analisadores no que se refere às contagens de reticulócitos em valores percentuais e absolutos. Análise de amostras apresentando corpúsculos de Hoewll-Jolly, eritroblastos e granulaçöes basófilas sugere näo haver interferência dessas alteraçöes na identificaçäo dos reticulócitos; 2) MFI e TMO: houve um aumento significativo nos valores de MFI em 11 pacientes pós-TMO, e essa resposta precedeu a recuperaçäo dos neutrófilos e das plaquetas. Quatro dos 15 pacientes estudados näo tiveram sucesso no procedimento de TMO e näo apresentaram recuperaçäo dos neutrófilos/plaquetas, assim como dos reticulócitos. Conclusäo: o Pentra 120 Retic fornece resultados precisos e de qualidade, e mostrou-se adequado para uso em rotina. Os parâmetros de imaturidade dos reticulócitos mostraram ser úteis no acompanhamento de pacientes submetidos a TMO, além de serem indicadores precoces da recuperaçäo medular

Determinação dos valores hematológicos e das concentrações séricas de ferro e ferritina em sangue de cordão umbilical de recém-nascidos de termo e pré-termo no Hospital Israelita Albert Einstein de São Paulo / Determination of hematologic values and serum concentration of iron and ferritin in umbilical cord blood of term and preterm newborn at the Hospital Israelita Albert Einstein of São Paulo - Brazil

Determinaram-se os valores hematológicos (Hb, Ht, VCM, HCM, CHCM, reticulócitos) e as concentrações séricas de ferro e ferritina no sangue de cordão umbilical de recém-nascidos (RN) no Hospital Albert Einstein. A amostra continha 32 RN de termo (T) e 30 RN pré-termo (PT). Os RN apresentavam-se clinicamente sadios, sendo excluídos os que apresentaram intercorrências clínicas ou no momento do parto. O sangue foi colhido por punção da veia umbilical até 5 minutos após a dequitação e encaminhado ao laboratório de patologia clínica para processamento laboratorial. Os valores hematológicos encontram-se mais elevados no grupo de RNT em relação ao grupo de RNPT (p<0,05). Ajustando-se um modelo de regressão logística múltipla, o Ht tem valor preditivo para a prematuridade, observando-se uma relação inversamente proporcional entre o valor do Ht e a idade gestacional.